دستیابی به کشت سه بعدی سلول های استئوبلاست مشتق از کالواریای انسانی در ایران

مهرآفرین فشارکی

دستیابی به کشت سه بعدی سلول های استئوبلاست مشتق از کالواریای انسانی در ایران عباسعلی ربیعی، ابراهیم اسفندیاری، مهرآفرین فشارکی، معصومه سنایی، بهرام امین منصور، بتول هاشمی بنی   صص 777-787  چکیده

مقدمه:شیوع بالای نقایص استخوانی در بیماران دچار ضربه در تصادفات و بروز کمبود بافت استخوانی در اعمال جراحی کرانیوتومی، ضرورت تام و تمام در تحقیق حاضر سلول های استئوبلاست به دست آمده از استخوان کالواریا در محیط سه بعدی آلژینات کشت داده شد و میزان تکثیر و زنده ماندن آن ها با سلول های حاصل از کشت تک  لایه ای مقایسه گردید. روش ها:در جریان اعمال جراحی کرانیوتومی 6 نمونه ی استخوانی  در اندازه های 1 × 1 سانتی متر از استخوان کالواریا تحت شرایط  استریل بر داشته و پس از جداسازی بافت های همبند و  شستشوی مکرر با سرم فیزیولوژی، قطعات استخوانی به ابعاد  کوچک در حدود 1 × 1 میلی متر خرد شد و در دیش های  محتوی محیط کشت قرار داده شد و به انکوباتور محتوی 5 درصد  دی اکسید کربن با رطوبت نسبی و دمای 37 درجه ی سانتی گراد منتقل گردید. پس از گذشت 9 تا 10 روز، سلول ها شروع به خروج  از استخوان نمودند و 2 هفته پس از شروع کشت، سلول ها کف  پلیت را به طور کامل پوشاندند. پس از تریپسینه کردن و شمارش، سلول ها به طور مساوی به دو بخش تقسیم گردید و کشت تک  لایه ای و در محیط دارای ژل آلژینات انجام شد. جهت اثبات  وجود سلول های استئوبلاست و فعالیت آن ها از رنگ آمیزی های  Von kossa ،Alkaline phosphatase و Azan استفاده شد. برای بررسی درصد زنده ماندن سلول ها از رنگ آمیزی Trypan blue استفاده گردید. یافته ها:در کشت تک لایه ای، سلول ها با ظاهری شبه  فیبروبلاستی و دوکی مشخص گردید در حالی که در کشت آلژینات، سلول ها نمای مدور داشت. در هر دو نوع کشت، تکثیر سلولی و فعالیت استخوان سازی وجود داشت. رنگ آمیزی Alkaline phosphatase در دو گروه وجود سلول های  استئوبلاست را به اثبات رسانید و رنگ آمیزی های Von kossaو Azanوجود ماتریکس معدنی و آلی را در دو گروه تایید کرد. با مقایسه  تعداد سلول ها در روز 21 با تعداد سلول ها در روز 1 همان گروه، اختلاف معنی داری مشخص شد (001/0 > P). همچنین شمارش سلولی دو گروه در روز 21 نشان داد که میزان تکثیر در گروه آلژینات نسبت به گروه تک لایه ای بیشتر بوده، اختلاف معنی داری مشاهده شد (001/0 > P) . نتیجه گیری:این مطالعه نشان داد که سلول های استئوبلاستی  بدون استفاده از آنزیم در محیط کشت قادر به خروج از بافت  استخوانی است و محیط سه بعدی ژل آلژینات سدیم در مقایسه با کشت تک لایه ، قادر است تکثیر و بقای این سلول ها را به طور بارز افزایش دهد. استئوبلاست، کشت تک لایه، آلژینات، آلکالین فسفاتاز.

http://www.magiran.com/magtoc.asp?mgID=1435&Number=102&Appendix=0